Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展较慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来家兔自身毒素到显现出来1HG乳癌病理腹泻的困难重重赴援在成人时期就有很好的描述，多个家兔自身毒素无症状的成人中的有70%在毒素冗余后10年内入院乳癌，而随访15年的成人这一比赴援减少到84%。远比之下，%病理1HG乳癌一半以上的HG1HG乳癌的患病机制还无法获得充分的科学研究。

日益多的人开始适用分期系统来假定1HG乳癌的困难重重：变异在显现出来多种家兔自身毒素时离开第1阶段，显现出来血糖异常时离开第2阶段，显现出来腹泻时离开第3阶段。一些多发家兔自身毒素无症状的变异，在1期和2期，困难重重较以致于快，并拓展为患病的1HG乳癌。我们在此之前描述了一第三组在首次监测到多种家兔自身毒素抽样后至少10年无乳癌的以致于以致于快困难重重者，这第三组病患者人数少，但特征非常明确。随后，我们发现家兔自身特异性特异性CD8+T细胞核反应会在困难重重平稳的病患者中的大体不依赖于，但在近来患病和长时长依赖于的乳癌病患者中的很容易监测到。这确实表明，与困难重重病患者远比，这些病患者自身特异性会的调控增强。

最初科学研究表明，尽管调控性T细胞核(Treg)比赴援正常，但乳癌病患者依赖于一些功用缺陷，其中的除此以外对IL-2的反应会灵活性降低。此外，乳癌病患者中的的畸变CD4+T细胞核确实对调控更加具抵抗性，展现为畸变T细胞核的选择性减弱，自然显现出的Treg和体内显现出的选择性Treg，以及特异性经历的CD4+T细胞核中的IL-2反应会减弱。本科学研究的意在是描述了CD4+调控性T细胞核(Treg)在在在以致于平稳困难重重者中的的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

原理：BOX科学研究是一项以人群为了将的垂直科学研究，在21岁以下确诊的病患者亲属中的检测1HG乳癌的危险因素。我们在此之前描述了长时长平稳困难重重者的特征，他们保持多重家兔自身毒素无症状最多10年，但无法显现出来乳癌的病理腹泻，以致于快性或非透过性自身免疫。随后，10名在此之后保持无乳癌并乐意提供大量尿液抽样的平稳困难重重者纳入T和B细胞核功用分析。在现有的科学研究中的，8名以致于快困难重重者(SP第三组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的家兔自身毒素无症状。所有的行动者都处于1HG乳癌困难重重的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身毒素对某些特异性的无症状反应会，然而，一名病患者已经处于2期至少6年，但无法显现出来病理腹泻，一名病患者被确诊为乳癌，该受试者72岁，在搜集实验抽样时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中的对该诱导透过了单独分析。剥离外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核忍术和T细胞核选择性试验车分析诱导中的Treg的Hz、变异和功用。适用FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)透过无监督聚类分析，分析Treg变异。

结果：与有益诱导远比，来自以致于快困难重重体的思绪CD4+T细胞核的监督聚类结果显示，激能活的思绪CD4+ TregHz减少，与利尿剂选择性的TNFR相关抗原(GITR)凸显减少有关。一名HbA1c消退的病患者与困难重重平稳者和冗余的相比较第三组远比，Treg谱有所完全相同。功用分析表明，与有益诱导远比，来自平稳困难重重体的Treg介导的CD4+畸变T细胞核选择性明显破损。展现为对畸变CD4+T细胞核CD25和CD134凸显的选择性减少。

左图1 深入的变异分析结果显示，CD4+Treg亚HG在以致于快困难重重缓冲区中的减少。由FlowSOM转化的Treg楼内，聚集在来自所有诱导的能活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标明物凸显检验出10个元簇:思绪T细胞核_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞核;HLA-DR + GITR +思绪T细胞核;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)适用9个完全相同Treg标明转化的10个元簇的MST。每个节点亦然一个空降兵(100个空降兵)，更加大的元空降兵(10个元空降兵)在节点第三组周边上色。每个节点中的的糕左图表示单个标明的凸显级别。(b)每个元聚类的热左图，以结果显示整体标明凸显。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化左图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比轻元素为每个metacluster装入直通左图(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞核(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞核(l)。紫色白点亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加表示法秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 适用CITRUS的预测模HG证实，TregHz的减少是困难重重平稳的标志。分级去以致于化(a - f)和甜菜分析(g-k)相比较SP行动者和冗余的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团体的亦然性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR凸显透过剥离，精心设计FlowSOM小团体。(b) HD(环纹)和SP(白斑)第三组以及诱导SP 606(紫色)中的CD25+ cd127的Hz统计左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去以致于化可数的装入直通左图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3凸显强度着色，斜线突出的簇被标识为SP和HD缓冲区中间的完全相同。(j)装入直通左图结果显示了在SP(白斑)和HD(灰点)第三组中的，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相比轻元素(比赴援)。(k)直方左图结果显示每个簇的变异(粉红色)和Treg标明相比凸显与故事情节凸显(浅蓝色);上列，存储器Treg_3;下面一路上，存储器Treg_4。故事情节与所有其他簇中的标明的凸显有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加表示法秩检验

左图3 与有益献血者远比，困难重重平稳者思绪treg的GITR减少。每个思绪CD4+T细胞核元簇(思绪T细胞核_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞核;HLA-DR + GITR +思绪T细胞核;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个凸显标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的凸显热左图(sp606不除此以外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR凸显串联，结果显示直方左图(c)和统计左图(d)。Wilcoxon相加表示法秩和检验，p< 0.07(紫色)所有诱导除此以外，p< 0.05(浅蓝色)诱导SP 606和冗余的HD不除此以外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR凸显，从分级去以致于化，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(紫色)串联，结果显示直方左图(e)和统计左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加表示法秩检验

左图4 来自平稳困难重重的CD4+ treg细胞核控制畸变CD4+T细胞核的灵活性降低。SP第三组用浅蓝色的直通和白点表示，HD第三组用白色的直通和白点表示，紫色的直通/白点表示诱导sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(转发者)被标明为CFSE, Treg按通过观察的比赴援滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞核，培训3同一天透过流式细胞核忍术监测。(a-d)与CD4+转发者相比应的treg培训(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培训。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE选择性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性%-。适用无症状相比较(激能活的响应细胞核另有treg)计算选择性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

左图5 畸变CD4+T细胞核对平稳困难重重的T细胞核再生的选择性更加敏感。SP第三组用浅蓝色的直通和白点表示，HD第三组用白色的直通和白点表示，紫色的直通/白点表示诱导sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标明，treg按通过观察的比赴援滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞核，培训3同一天透过流式细胞核忍术(CD25反染)和细胞核因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者协同培训。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE选择性%-(b)。(c,d) CD25选择性%-(c)和CD134选择性%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中的的凸显。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

事实：我们得出的事实是，来自平稳困难重重子的再生思绪CD4+Treg在GITR凸显中的获得了扩展和丰富，凸显了再进一步科学研究Treg在1HG乳癌危险性变异中的的异质性的全面性。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28