Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型哮喘患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来胰脏自身免疫反应以到显现出来1M-癌症临床病征的困难重重率在儿童时代就有很好的所述，多个胰脏自身免疫反应以阳性的儿童里有70%在血清转换成后10年内身患癌症，而随访15年的儿童这一比重提高到84%。相对来说之下，分之二临床1M-癌症一半以上的M-1M-癌症的复发机制还并未得到合理的研究成果。

越来越多的人开始使用分阶段种系统来度量1M-癌症的困难重重：群体在显现出来多种胰脏自身免疫反应以时转到第1阶段，显现出来血糖诱发时转到第2阶段，显现出来病征时转到第3阶段。一些多发胰脏自身免疫反应以阳性的群体，在1期和2期，困难重重较极快，并发展为复发的1M-癌症。我们此前所述了一四组在首次样品到多种胰脏自身免疫反应以结果显示后至少10年无癌症的极极快困难重重者，这四组病变人数少，但特质非常明确。随后，我们发现胰脏自身抗原特异性CD8+T该线粒体加成在困难重重比较极快的病变里基本不发挥作用，但在近期复发和长年发挥作用的癌症病变里很容易样品到。这可能表明，与困难重重病变相对来说，这些病变自身免疫加成的平衡增强。

早期研究成果表明，尽管平衡性T该线粒体(Treg)数量正常，但癌症病变发挥作用一些动态缺陷，其里包括对IL-2的加成能够下降。此外，癌症病变里的现像CD4+T该线粒体可能对平衡更具抵抗性，乏善可陈为现像T该线粒体的依赖性减弱，自然现象产生的Treg和体外产生的诱发Treg，以及抗原个人经历的CD4+T该线粒体里IL-2加成减弱。本研究成果的目的是所述了CD4+平衡性T该线粒体(Treg)在一小群极比较极快困难重重者里的特质，他们的平均年龄组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁不限确诊的病变亲属里体检1M-癌症的生命危险因素。我们此前所述了长年比较极快困难重重者的特质，他们保证多重胰脏自身免疫反应以阳性超过10年，但并未显现出来癌症的临床病征，极快性或非开展性自身免疫。随后，10名继续保证无癌症并愿意提供大量血液结果显示的比较极快困难重重者纳入T和B该线粒体动态比对。在目前的研究成果里，8名极快困难重重者(SP四组)，里位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的胰脏自身免疫反应以阳性。所有的参与者都处于1M-癌症困难重重的1期，尽管一些人随后得不到了胰脏自身免疫反应以对某些抗原的阳性加成，然而，一名病变早已处于2期至少6年，但并未显现出来临床病征，一名病变被病因为癌症，该受试者72岁，在采自实验结果显示时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据比对里对该遗传物质开展了单独评量。分离外周血单个质子该线粒体(PBMCs)，采用多参数流式该线粒体术和T该线粒体依赖性试制评量遗传物质里Treg的基频、表M-和动态。使用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无全权负责聚类比对，评量Treg表M-。

结果：与身体健康遗传物质相对来说，来自极快困难重重体的梦境CD4+T该线粒体的全权负责聚类看出，启动时的梦境CD4+ Treg基频提高，与利尿剂诱发的TNFR相关蛋白(GITR)理解提高有关。一名HbA1c下降时的病变与困难重重比较极快者和比如说的相比较四组相对来说，Treg谱有所各有不同。动态早已有，与身体健康遗传物质相对来说，来自比较极快困难重重体的Treg介导的CD4+现像T该线粒体依赖性明显受到影响。乏善可陈为对现像CD4+T该线粒体CD25和CD134理解的依赖性提高。

所示1 深入的表M-比对看出，CD4+Treg亚M-在极快困难重重链表里提高。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -该线粒体上。根据标记物理解鉴定出10个元簇:梦境T该线粒体_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T该线粒体;HLA-DR + GITR +梦境T该线粒体;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)使用9个各有不同Treg标记填充的10个元簇的MST。每个终端都是一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在终端四组周围上色。每个终端里的饼所示暗示单个标记的理解级别。(b)每个元聚类的热所示，以看出基本标记理解。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)填充所示，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于原三子量为每个metacluster盒该线所示(原三子量> 0.05%)确定为HD和SP四组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T该线粒体(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T该线粒体(l)。浅蓝色格三子都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 使用CITRUS的预测模M-证实，Treg基频的提高是困难重重比较极快的标志。这两项离三子通道(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP参与者和比如说的HD参与者在CD4+CD45RA−T该线粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的都是性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解开展分离，实时FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(白点)四组以及遗传物质SP 606(浅蓝色)里CD25+ cd127的基频概述所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离三子通道三子集的盒该线所示;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，格三子突出的簇被辨认为SP和HD链表间的各有不同。(j)盒该线所示看出了在SP(白点)和HD(灰点)四组里，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对于原三子量(比重)。(k)直方所示看出每个簇的表M-(粉红色)和Treg标记相对于理解与历史背景理解(蓝色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。历史背景与所有其他簇里标记的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

所示3 与身体健康献血者相对来说，困难重重比较极快者梦境treg的GITR提高。每个梦境CD4+T该线粒体元簇(梦境T该线粒体_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T该线粒体;HLA-DR + GITR +梦境T该线粒体;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个理解标记的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的理解热所示(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里所有HD(蓝灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR理解串联，看出直方所示(c)和概述所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有遗传物质包括，p< 0.05(蓝色)遗传物质SP 606和比如说的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR理解，从这两项离三子通道，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，看出直方所示(e)和概述所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

所示4 来自比较极快困难重重的CD4+ treg该线粒体控制现像CD4+T该线粒体的能够下降。SP四组用蓝色的该线和格三子暗示，HD四组用蓝色的该线和格三子暗示，浅蓝色的该线/格三子暗示遗传物质sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T该线粒体开展分选。CD4+CD25−(；也者)被标记为CFSE, Treg按注意到的比重溶液。用抗CD3 /28微珠活化该线粒体，指导3过后开展流式该线粒体术样品。(a-d)与CD4+；也者相对于应以的treg指导(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性一般而言。使用阳性相比较(启动时的响应以该线粒体不含treg)近似值依赖性一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 现像CD4+T该线粒体对比较极快困难重重的T该线粒体活化的依赖性更敏感。SP四组用蓝色的该线和格三子暗示，HD四组用蓝色的该线和格三子暗示，浅蓝色的该线/格三子暗示遗传物质sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T该线粒体开展分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标记，treg按注意到的比重溶液。用抗CD3 /28微珠活化该线粒体，指导3过后开展流式该线粒体术(CD25反染)和该线粒体因三子比对。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性花红(b)。(c,d) CD25依赖性花红(c)和CD134依赖性花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导里的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们得出的论证是，来自比较极快困难重重三子的活化梦境CD4+Treg在GITR理解里得到了扩展和丰富，强调了大幅度研究成果Treg在1M-癌症风险群体里的关联性的必要性。

出处出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28