Diabetologia：应答但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现家兔自身免疫到浮现1同型癌症临床症状的成效赴援在成人时期就有极佳的揭示，多个家兔自身免疫阳性的成人之前有70%在血清转换成后10年内患上癌症，而随访15年的成人这一比例增加到84%。相非常之下，占临床1同型癌症一半以上的同型1同型癌症的发作系统还没有人取得前提的研究工作。

越来越多的人开始采用分期系统来表述1同型癌症的成效：幼体在浮现多种家兔自身免疫时踏入第1收尾，浮现血糖异常时踏入第2收尾，浮现症状时踏入第3收尾。一些多发家兔自身免疫阳性的幼体，在1期和2期，成效较慢速，并演进为发作的1同型癌症。我们之前揭示了一第三组在首次监测到多种家兔自身免疫比对后据估计10年无癌症的近乎慢速成效者，这第三组病人人数少，但构造非常指明。随后，我们断定家兔自身免疫特异性CD8+T细胞连锁反理应自由基在成效非常慢速的病人之前基本不存在，但在近期发作和长期存在的癌症病人之前很容易监测到。这可能暗示，与成效病人相非常，这些病人自身免疫自由基的调节加强。

晚期研究工作暗示，尽管调节性T细胞连锁反理应(Treg)数量正常，但癌症病人存在一些特性缺陷，其之前仅限于对IL-2的自由基意志力增加。此外，癌症病人之前的波动CD4+T细胞连锁反理应可能对调节兼具抵抗性，展现为波动T细胞连锁反理应的消除减弱，大自然造成的Treg和体外造成的诱导Treg，以及免疫漫长的CD4+T细胞连锁反理应之前IL-2自由基减弱。本研究工作的目的是揭示了CD4+调节性T细胞连锁反理应(Treg)在一小群近乎非常慢速成效者之前的构造，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以许多人为基础的横向研究工作，在21岁以下确诊的病人家庭成员之前检查1同型癌症的危险考量。我们之前揭示了长期非常慢速成效者的构造，他们保持良好多重家兔自身免疫阳性超过10年，但没有人浮现癌症的临床症状，慢速性或非进行性自身免疫。随后，10名暂时保持良好无癌症并愿意提供大量血液比对的非常慢速成效者扩及T和B细胞连锁反理应特性深入研究工作。在目前的研究工作之前，8名慢速成效者(SP第三组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的家兔自身免疫阳性。所有的行动者都处于1同型癌症成效的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身免疫对某些免疫的阳性自由基，然而，一名病人现在处于2期据估计6年，但没有人浮现临床症状，一名病人被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集实验室比对时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究工作之前对该遗传物质进行了单独检验。复合外周血单个连锁反理应细胞连锁反理应(PBMCs)，采用多参数流式细胞连锁反理应术和T细胞连锁反理应消除试验性检验遗传物质之前Treg的频赴援、表同型和特性。采用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究工作、表征和回归)进行无监理聚类深入研究工作，检验Treg表同型。

结果：与身体健康遗传物质相非常，来自慢速成效体的梦境CD4+T细胞连锁反理应的监理聚类揭示，激活着的梦境CD4+ Treg频赴援增加，与糖皮质激素诱导的TNFR相关酶(GITR)表述增加有关。一名HbA1c下降的病人与成效非常慢速者和匹配的对照第三组相非常，Treg谱有所不同。特性深入研究工作暗示，与身体健康遗传物质相非常，来自非常慢速成效体的Treg内源性的CD4+波动T细胞连锁反理应消除明显受损。展现为对波动CD4+T细胞连锁反理应CD25和CD134表述的消除增加。

左图1 深入的表同型深入研究工作揭示，CD4+Treg亚同型在慢速成效缓冲区之前增加。由FlowSOM填充的Treg过道，聚集在来自所有遗传物质的活着CD4+CD45RA -细胞连锁反理应上。根据标明物表述深入研究工作出新10个元簇:梦境T细胞连锁反理应_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞连锁反理应;HLA-DR + GITR +梦境T细胞连锁反理应;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)采用9个不同Treg标明填充的10个元簇的MST。每个端口都有一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在端口第三组四周上色。每个端口之前的糕左图声称单个标明的表述级别。(b)每个元聚类的热左图，以揭示整体标明表述。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)填充左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下连锁反理应素为每个metacluster筒线或左图(连锁反理应素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞连锁反理应(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞连锁反理应(l)。深蓝色圆圈都有理理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 采用CITRUS的预测模同型声称，Treg频赴援的增加是成效非常慢速的标志。分级内源性(a - f)和柑橘深入研究工作(g-k)非常SP行动者和匹配的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞连锁反理应上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的近现代左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR表述进行复合，仿真FlowSOM社会阶层。(b) HD(白斑)和SP(白斑)第三组以及遗传物质SP 606(深蓝色)之前CD25+ cd127的频赴援汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+内源性子集的筒线或左图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，箭头突出新的簇被识别为SP和HD缓冲区两者之间的不同。(j)筒线或左图揭示了在SP(白斑)和HD(灰点)第三组之前，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相比之下连锁反理应素(比例)。(k)直方左图揭示每个簇的表同型(深蓝色)和Treg标明相比之下表述与着重表述(蓝色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。着重与所有其他簇之前标明的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与身体健康献血者相非常，成效非常慢速者梦境treg的GITR增加。每个梦境CD4+T细胞连锁反理应元簇(梦境T细胞连锁反理应_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞连锁反理应;HLA-DR + GITR +梦境T细胞连锁反理应;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个表述标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的表述热左图(sp606不仅限于在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇之前所有HD(棕色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表述串联，揭示直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有遗传物质仅限于，p< 0.05(蓝色)遗传物质SP 606和匹配的HD不仅限于在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR表述，从分级内源性，从所有HD(棕色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，揭示直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自非常慢速成效的CD4+ treg细胞连锁反理应控制波动CD4+T细胞连锁反理应的意志力增加。SP第三组用蓝色的线或和圆圈声称，HD第三组用蓝色的线或和圆圈声称，深蓝色的线或/圆圈声称遗传物质sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞连锁反理应进行分选。CD4+CD25−(理应答者)被标明为CFSE, Treg按通过观察的比例溶液。用抗CD3 /28微珠活着化细胞连锁反理应，人才3天后进行流式细胞连锁反理应术监测。(a-d)与CD4+理应答者相比之下理应的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD理应答者人才。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。采用阳性对照(激活着的响理应细胞连锁反理应不含treg)计算消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究工作。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

左图5 波动CD4+T细胞连锁反理应对非常慢速成效的T细胞连锁反理应活着化的消除更敏感。SP第三组用蓝色的线或和圆圈声称，HD第三组用蓝色的线或和圆圈声称，深蓝色的线或/圆圈声称遗传物质sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞连锁反理应进行分选。CD4+CD25−(理应答者)被cfsel标明，treg按通过观察的比例溶液。用抗CD3 /28微珠活着化细胞连锁反理应，人才3天后进行流式细胞连锁反理应术(CD25反染)和细胞连锁反理应因子深入研究工作。HD Treg与HD、SP或sp606理应答者共同人才。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE消除百分赴援(b)。(c,d) CD25消除百分赴援(c)和CD134消除百分赴援(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才之前的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究工作。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

论证：我们得出新结论的论证是，来自非常慢速成效子的活着化梦境CD4+Treg在GITR表述之前取得了扩展和多样，强调了进一步研究工作Treg在1同型癌症风险幼体之前的异质性的必要性。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28