Diabetologia：激活但功能受损的梦境Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现胰脏自身HIV到经常出现1标准型乳癌流行病学病症的令人满意部将在儿童后期就有很好的描绘，多个胰脏自身HIV感染性的儿童里面有70%在血清切换后10年内患上乳癌，而随访15年的儿童这一比部将增高到84%。远比之下，占流行病学1标准型乳癌一半以上的标准型1标准型乳癌的复发机制还没有赢取充分的研究工作。

越来越多的人开始运用于分阶段系统来定义1标准型乳癌的令人满意：群体在经常出现多种胰脏自身HIV时带入第1期中，经常出现血糖异常时带入第2期中，经常出现病症时带入第3期中。一些多发胰脏自身HIV感染性的群体，在1期和2期，令人满意较慢，并发展为复发的1标准型乳癌。我们在此之前描绘了一三组在首次样品到多种胰脏自身HIV检验后大概10年无乳癌的极慢令人满意者，这三组病人人数少，但特质非常明确。随后，我们挖掘出胰脏自身受体质抗体CD8+T细胞膜加成在令人满意平稳的病人里面大体不依赖于，但在近期复发和长时间段依赖于的乳癌病人里面很容易样品到。这似乎说明了，与令人满意病人远比，这些病人诱发加成的适度弱化。

早期研究工作说明了，尽管适度性T细胞膜(Treg)数量正常，但乳癌病人依赖于一些系统不足之处，其里面包括对IL-2的加成能力也降低。此外，乳癌病人里面的畸变CD4+T细胞膜似乎对适度愈来愈具抵抗性，表现为畸变T细胞膜的依赖性向西移动，纯净造成的Treg和体外造成的抑止Treg，以及受体质经历的CD4+T细胞膜里面IL-2加成向西移动。本研究工作的目的是描绘了CD4+适度性T细胞膜(Treg)在大群极平稳令人满意者里面的特质，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群辅以的中轴研究工作，在21岁所列出院的病人亲属里面检查1标准型乳癌的危险因素。我们在此之前描绘了长时间段平稳令人满意者的特质，他们始终保持多重胰脏自身HIV感染性最多10年，但没有经常出现乳癌的流行病学病症，慢性或非进行时性诱发。随后，10名再次始终保持无乳癌并愿意发放大量血液检验的平稳令人满意者纳入T和B细胞膜系统建模。在目前的研究工作里面，8名慢令人满意者(SP三组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的胰脏自身HIV感染性。所有的参加者都位处1标准型乳癌令人满意的1期，尽管一些人随后保住了胰脏自身HIV对某些受体质的感染性加成，然而，一名病人并未位处2期大概6年，但没有经常出现流行病学病症，一名病人被出院为乳癌，该受试者72岁，在采集实验检验时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据建模里面对该抑止进行时了单独评估。分离外周血单个连锁加成细胞膜(PBMCs)，有别于多参数流式细胞膜法术和T细胞膜依赖性试验评估抑止里面Treg的基频、表标准型和系统。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类断定、之外联和回归)进行时无督导聚类建模，评估Treg表标准型。

结果：与生活品质抑止远比，来自慢令人满意体的无意识CD4+T细胞膜的督导聚类看出，激能活的无意识CD4+ Treg基频增高，与糖皮质激素抑止的TNFR之外受体(GITR)表达出来增高有关。一名HbA1c升温的病人与令人满意平稳者和最简单的对照三组远比，Treg谱有所不同。系统建模说明了，与生活品质抑止远比，来自平稳令人满意体的Treg介导的CD4+畸变T细胞膜依赖性微小损伤。表现为对畸变CD4+T细胞膜CD25和CD134表达出来的依赖性增高。

三幅1 集中的表标准型建模看出，CD4+Treg亚标准型在慢令人满意描绘符里面增高。由FlowSOM转化成的Treg过道，组织起来在来自所有抑止的能活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标上物表达出来断定出10个元簇:无意识T细胞膜_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)运用于9个不同Treg标上转化成的10个元簇的MST。每个节点值得一提的是一个一个大(100个一个大)，愈来愈大的元一个大(10个元一个大)在节点三组周围上色。每个节点里面的饼三幅坚称单个标上的表达出来级别。(b)每个元聚类的热三幅，以看出整体标上表达出来。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)转化成三幅，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的裂口。(e-l)相对于重元素为每个metacluster筒线或三幅(重元素> 0.05%)确定为HD和SP三组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞膜(l)。粉红色带子值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon举例来说大写字母秩断定。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 运用于CITRUS的预测模标准型断定，Treg基频的增高是令人满意平稳的标志。基准离子通道(a - f)和经济作物建模(g-k)比起SP参加者和最简单的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的指标性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来进行时分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)三组以及抑止SP 606(粉红色)里面CD25+ cd127的基频汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道偏序的筒线或三幅;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来其中心着色，箭头显眼的簇被鉴别为SP和HD描绘符彼此间的不同。(j)筒线或三幅看出了在SP(黑斑)和HD(灰点)三组里面，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对于重元素(比部将)。(k)数据集看出每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标上相对于表达出来与时代背景表达出来(蓝色);上列，磁盘Treg_3;下面四人，磁盘Treg_4。时代背景与所有其他簇里面标上的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon举例来说大写字母秩断定

三幅3 与生活品质献血者远比，令人满意平稳者无意识treg的GITR增高。每个无意识CD4+T细胞膜元簇(无意识T细胞膜_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个表达出来标上的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描绘符的表达出来热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里面所有HD(白色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR表达出来串联，看出数据集(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon举例来说大写字母秩和断定，p< 0.07(粉红色)所有抑止包括，p< 0.05(蓝色)抑止SP 606和最简单的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表达出来，从基准离子通道，从所有HD(白色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)串联，看出数据集(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon举例来说大写字母秩断定

三幅4 来自平稳令人满意的CD4+ treg细胞膜掌控畸变CD4+T细胞膜的能力也降低。SP三组用蓝色的线或和带子坚称，HD三组用紫色的线或和带子坚称，粉红色的线或/带子坚称抑止sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(应答者)被标上为CFSE, Treg按观察的比部将指示剂。用抗CD3 /28微珠能还原细胞膜，人才培养3当晚进行时流式细胞膜法术样品。(a-d)与CD4+应答者相对于应的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者人才培养。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE依赖性一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性一般而言。运用于感染性对照(激能活的作出反应细胞膜则有treg)计算依赖性一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差建模。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

三幅5 畸变CD4+T细胞膜对平稳令人满意的T细胞膜能还原的依赖性愈来愈敏感。SP三组用蓝色的线或和带子坚称，HD三组用紫色的线或和带子坚称，粉红色的线或/带子坚称抑止sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标上，treg按观察的比部将指示剂。用抗CD3 /28微珠能还原细胞膜，人才培养3当晚进行时流式细胞膜法术(CD25反染)和细胞膜因子建模。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同人才培养。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE依赖性百分部将(b)。(c,d) CD25依赖性百分部将(c)和CD134依赖性百分部将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养里面的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差建模。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

结论：我们得出的结论是，来自平稳令人满意子的能还原无意识CD4+Treg在GITR表达出来里面赢取了扩展和丰富，特别强调了进一步研究工作Treg在1标准型乳癌似乎性群体里面的互补的重要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28